Anpil fwa te mande kesyon osijè de cellules kase

1. e coli rapid pwoteyin etranje. Lè sonicated, li te sispann nan PBS contenant 1% triton-X-100. Efè ltrason pi bon. Efè 1% triton-X-100 toujou evidan. Kèk lòt bakteri tou travay, tankou Streptomyces. Apre sa, ap eksprime pwoteyin recombinant a, cellules yo te perturbé pa à sèlil tèt chaje, w ap itilize yon glas Batcheba, 400w, ak 2 pou 1s, pou ou kraze. Men yon laj montan kim pou te pwodwi nan yon ti tan, ki afekte pouvwa k'ap travay la. Mémoires de rekò ak tris te tankou sa a. Se pa fin konprann pyès, ak pwoteyin sib la se nan sa yo klè cellules, kisa m dwe fè?

Analiz: La bulle a pou te pwodwi paske pozisyon envestigasyon an pa mete byen, ankèt la dwe tou pre a bounda bough @ branch, osijè de 0.5-1 cm, pouvwa yo ap varye selon laye, men likid nivo a kapab obsève, se fluctuation men pa twò fò, ou ka chwazi à cellules si mwa kraze pou 3s pou 10s a, yo kraze pou 20 - 30 fwa. Pozisyon kònen klewon an ta dwe tou pou te note. Si son an pa sa, li ta dwe ajusté nan tan, konsidere a konsantrasyon bakteri an. Eseye pou ogmante volim lè ap kraze, fòs Zui la pa ta dwe depase 60%, eseye pou kraze en pou en, pou kèk protéines bakteri, li difisil pou gaye pwoteyin pou koze après pwoteyin pou pwodwi bulles, ki kapab en pou yon ti kras ankò. Yon pwoteyin ki te twouve nan fòm kò enklizyon.

2. sa se kondisyon yo pou sonication de Streptomyces (actinomycètes)?

Analyse: actinomycètes fè pati pou (G plis pase C) wo dan pousantaj (mol %) Gram-positive (Eubacteria) bèl gwoup la sou bwa a aperçu sistèm procaryote la, ki gen moléculaire ak Byolojik karakteristik inik pou prokaryotes. Sepandan, nan diferan gwoup li, chimik konpozisyon miray sèlil varies anpil anpil. Nan ltrason e. coli, 400W ki itilize, metòd vyole 5s pou 5s efektif, men te itilize nan Streptomyces, epi li pa gen anyen an diferans nan selil miray konpozisyon. Tretman pre rotation de Streptomyces (actinomycètes) configuré jeneralman pou yon sèten konsantrasyon bakteri sispansyon. Kondisyon espesifik yo pou moulen itilize disruptor sèlil à la se: kolekte bakteri an nan solisyon kilti 24 h nan 5 000 r / min pou min 5 pou kolekte cellules yo, lavaj; twalèt ak yon pH 7.5 Na2HPO-tanpon NaH2PO 3 fwa sa a, lè sa a cellules yo te formulées nan yon 1:3 bakteri sispansyon itilize tanpon a. Plase nan yon 40 mL gwo plastik tib tès, kote a laj plastik tib tès nan yon gwo lagrèl ak kraze l' ak yon disrupter à sèlil (pouvwa 200W, 1/2" ankèt, kò kraze pou années, ki ale vini années), kraze solisyon nan 12 000 r/min balanse nan vitès anwo nan syèl la pou 30 min, collect sèlil debri ak liquide. Beny cellules kapab tou W'a benyen yo yon fwa ki te fèt avan par salin oubyen Tris-HCl nan pH 8. An plis, dòz à la varies anpil anpil avèk montan an echantiyon yo ak bakteri an. Pouvwa a kapab 400-600w, kraze pou 5s, li te kanpe pou 5s, lagrèl vapè, e dènye a konsantrasyon milimèt 1 PMSF te ajoute. Pou detèmine apwopriye entansite à la ak chak Konben fwa, li nesesè pou yo tcheke si bakteri an yo miyèt moso nenpòt ki lè.